1. 背景 Fluoro-Gold的使用原理與其他熒光示蹤劑基本相同。主要區別在于，Fluoro-Gold在注射后存活時間、濃度 范圍、組織處理方式以及與其他組織化學技術的兼容性方面更具靈活性。 

2. 儲存與保質期 Dry Fluoro-Gold 應儲存于避光、密封的容器中，溫度保持在 4 攝氏度。正確儲存條件下，Fluoro-Gold 的保質期應超過一 年。溶液中的染料亦應儲存于避光、密封的容器中，溫度保持在 4 攝氏度；在此條件下，其穩定性至少可維持六個月。 

3. 車輛 氟金可溶于蒸餾水或0.9%生理鹽水，亦可作為0.2M中性磷酸鹽緩沖液中的懸浮液使用。 

4. 染料濃度 氟金（Fluoro-Gold）已在1%-10%的濃度范圍內成功應用。初始推薦濃度為4%。若注射部位出現不良壞死 反應或標記信號過強，應將濃度降至2%溶液。如需進行更精確的測量，需知氟金的分子量為532.6道爾頓。 

5. 染料給藥 A. 壓力注射——這可能是常用的給藥方式。注射體積范圍為0.05–1 µl ，通常為0.1–0.2 µl 。 B. 離子電滲療法——通過4-10秒的脈沖式離子電滲治療（電流強度為+5至+10微安/10分 鐘），可形成離散的小型注射點。 C. 晶體——示蹤劑晶體可通過微吸管尖部進行給藥。 

6. 術后生存期 已觀察到良好的逆行標記效果，其持續時間范圍從兩天至兩個月不等。典型的存活期為三至五天。較長的 存活期可增強遠端突起的染色填充效果，同時避免染料從細胞中擴散。 

7. 固定；注視 幾乎任何固定劑均可使用，亦可不使用固定劑；通常采用含4%甲醛的磷酸鹽中性緩沖鹽水。含有高濃度重 金屬（如鋨、汞）的固定劑會淬滅熒光信號，而高濃度（超過1%）的戊二醛則可能增強背景熒光。 

8. 組織化學處理 含有熒光金的組織可采用幾乎所有常見的組織學技術進行處理。這包括未固定的組織冷凍切片（10 µ m）、固定的組織冷凍切片（20 µm），以及從包埋于塑料（0.2–4 µm）或石蠟（3–10 µm）中的組織切 制的薄切片。其中，固定的組織冷凍切片最為常用。 

9. 組合方法 在這一處理階段，樣本切片可進一步進行第二種標記技術處理，例如放射自顯影、 HRP 組織化學、免疫細胞化學、 第二種熒光示蹤劑或熒光復染等。 

10. 安裝、清理和覆蓋 切片通常固定于明膠包被的載玻片上，經空氣干燥后浸入二甲苯中，并用非熒光 DPX 塑料封片劑進行封 片。除非與第二種示蹤劑不兼容，否則切片可采用梯度酒精進行脫水處理。若需將熒光金技術與熒光免 疫細胞化學技術聯用，則切片經空氣干燥后直接用中性緩沖甘油（1:2）進行封片。 

11. 檢查與攝影 氟金可通過熒光顯微鏡并使用寬帶紫外激發濾光片進行觀察。當組織經中性pH緩沖液處理后會發出金色熒光，而組織經其 他處理時則會發出藍色熒光。該樣本采用酸性（例如pH 3.3）pH緩沖液進行處理。可采用數字方式或膠片進行拍攝（彩色打印使用Ektachrome 200-400 ASA膠片，黑白打印則使用同等感光度的膠片，例如Tri-X）。曝光時間通常為10至60秒， 具體取決于物鏡放大倍數和標記物的強度；30秒的曝光時間約為平均值。可通過多次曝光同時觀察熒光金 與其他示蹤劑。因此，在放射自顯影技術中，可將紫外光與明場照明結合，同時定位熒光金與 HRP 或銀顆 粒；同樣，藍光激發可同時顯示FITC的綠色發射信號，而綠光激發則可用于同步觀察碘化丙啶或溴化乙錠 （一種熒光復染劑）的紅色發射信號。 

關于氟金應用的補充信息 

車輛 對于通過微量注射器或微管進行的壓力注射，氟金（Fluoro-Gold）應溶解于蒸餾水中。 .9%生理鹽水。氟金也可作為懸浮液使用于0.2M中性磷酸鹽緩沖液中，但懸浮顆粒可能堵塞精細微量移液 管尖部，因此蒸餾水或0.9%生理鹽水是更優選的載體。對于離子電滲療法，需將1%氟金溶液配制于0.1M 乙酸緩沖液（pH=3.3）中。經過清洗（95% ETOH ，水）的玻璃微量移液管尖部直徑應為10-20 µ m 。最佳離子電滲參數為：以脈沖電流（通電4-10秒，斷電4-10秒）施加+1至+5微安電流，持續時間 10-20分鐘。 

注射部位 幾乎任何中樞或周圍神經系統結構均可注射氟金（Fluoro-Gold）以用于逆行運輸分析。在周圍神經系統 中，可對神經節及周圍靶點進行研究。進行周圍神經研究時，需切斷或損傷神經，并將其浸入或注射含5% 氟金水溶液。由于氟金不會被完整的傳導纖維顯著攝取，因此必須切斷或嚴重損傷纖維才能實現染料的攝 取。 

運輸與存活時間 氟金（Fluoro-Gold）被用作逆行性軸突示蹤劑，盡管順行性軸突運輸確實會發生。應調整其存活時間（尤 其是縮短至12小時至2天），以在所研究的特定神經元系統中順行性運輸效率。對于逆行性運輸，存 活時間應調整為4天至14天。對于大多數系統而言，7至10天即可滿足需求；然而，較長的神經通路（例如 從脊髓到腦干）以及大型哺乳動物（如貓、猴）的通路可能需要更長的存活時間（例如14天）。此外，由 于氟金在逆行標記的神經元內分布迅速，數月的存活時間同樣能獲得優異效果。對于離子電滲法，推薦采 用2至5天的存活時間。據估計，哺乳動物的運輸速度約為每天2厘米；而冷血動物的運輸速度較慢。 

組織處理 組織處理方法在使用指南及原始出版物（Schmued and Fallon，1986，Brain Research 377:147-154）中均有 詳細說明。由于熒光金在多種溶劑中均具有穩定性，且在逆行標記的神經元內保持快速分布特性，其應用 兼容多種組織化學技術。該技術可與其他逆行追蹤劑、免疫熒光法、PAP與ABC免疫細胞化學法、 HRP 組織化學法、放射自顯影技術、復染法（選擇溴化乙錠作為熒光復染劑）、石蠟包埋及塑料包埋技術共同 使用。然而，若組織未經固定，需在水性溶液中進行超過一至兩小時的額外處理，會導致標記神經元中的 熒光金熒光信號消失。熒光金在電子顯微鏡觀察中具有應用價值；其亦可用于已切片并轉移至磷酸鹽緩沖 液中的腦組織樣本。切片通常固定于明膠包被的載玻片上，經空氣干燥后浸入二甲苯中，并用 DPX 塑料 封片劑進行封片。組織也可直接在載玻片上觀察而無需進一步處理；也可通過梯度酒精進行脫水處理；對 于免疫細胞化學檢測，切片可經空氣干燥后直接用中性緩沖甘油（1:2）進行封片。 

檢查與攝影 熒光金需使用配備寬波段紫外（UV）激發濾光片的熒光顯微鏡進行觀察。應采用與其他寬波段紫外激發的 熒光逆行示蹤劑（如True Blue、Fast Blue、Nuclear Yellow）相同的濾光片組，例如Leitz Phloem濾光系統A （寬波段UV，激發濾光片BP 340-380）、Mirror RKP 400、Barrier Filter LP 430）。載物臺應專門用于熒光 顯微鏡（如蔡司品牌產品），材質可選用甘油或水。由于塑料會吸收紫外光，不建議通過塑料培養皿等介 質觀察樣本。推薦使用的膠片為T-Max（柯達，黑白）和Ektachrome 200（柯達，彩色）。曝光時間通常為 20秒至1.5分鐘