產品中心
Product Center
產品簡介
Genovis：LysCERATOR Lyophilized LysCERAT（Lys-C）是一種賴氨酸特異性內肽酶，能夠分解賴氨酸殘基的C端蛋白質，包括賴氨酸-Proline連接處。
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | B0-LC1-020 |
|---|---|---|---|
| 供貨周期 | 一個月 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
Genovis為生物制藥和科研行業的客戶提供工具，促進并節省新治療方法和診斷技術開發的時間。Genovis 酶產品，SmartEnzymes™是一系列獨特的快速且易用的酶促工具，旨在提升復雜生物制藥分析或制備工作流程中的療效和通量。這些酶被全球科學家廣泛使用，創新的產品形式促進了生物藥物的表征、開發、生產和質量控制。
Genovis研發活動的基石之一是客戶關系，使產品開發能夠滿足客戶需求。同樣寶貴的是與專注于新酶表征、開發新工作流及新靶點抗體的學術團隊合作。
Genovis：LysCERATOR Lyophilized
在100 mM Tris pH 8.0（含4M尿素）中，37°C培養2小時時，0.01微克LysCERator液溶酶≥90%的1微克人IgG1。
LysCERATOR在Tris和HEPES緩沖液中，pH值為7.0至9.0，活性最佳。在變性條件下，活性可保持至8 M尿素和2 M 鹽酸胍。
LysCERATOR凍干的液態以50 mM HEPES、100 mM NaCl、2%海藻糖、pH 8.5、未添加防腐劑的液質干燥狀態供應。它以冷藏方式運輸，抵達時應保持在-20°C下保存。重建后，LysCERATOR液溶脂后在-20°C下穩定4周，+4-8°C下穩定1周。
Genovis：LysCERATOR Lyophilized
應用
增強了具有挑戰性的K–P位點的切割，減少了遺漏的切割，并實現了更完整、更自信的肽鑒定。
賴氨酸殘基處的切割后再切割Proline（K–P位點）是Lys-C消化中一個的挑戰，常因Proline誘導的構象約束而導致缺失切割。為評估LysCERAT克服這一局限的效果，對其在K–P位點的表現進行了詳細評估，并與兩種市面上可用的Lys-C酶——一種非重組酶和一種重組酶——進行了比較。
使用Trastuzumab評估了消化效率。圖示了來自輕鏈N端的兩種肽的相對強度：LC aa 1–39，代表預期切割，LC aa 1–42，包含K39/P40位點缺失的切割。經過2小時的LysCERATOR消化后，切割的肽（LC aa 1–39）成為較多的類型，而用非重組替代的Lys-C消化主要產生錯切肽（LC aa 1–42）。
經過LysCERATOR隔夜消化后，K-P位點幾乎消化，而與非重組替代Lys-C消化后，仍保留大量誤切肽。與重組替代Lys-C消化后，兩種肽的整體信號強度較低，顯著的是含有兩個缺失切割的肽（LC aa 1–45 – 未顯示）。
綜合來看，這些結果表明，LysCERAT在具有挑戰性的K–P位點的消化效率優于其他Lys-C酶，導致漏切更少，蛋白水解過程更完整。
K-P位點Lys-C消化效率比較兩種Trastuzumab輕鏈肽的強度：1）aa 1-39，代表預期的切割產物;2）aa 1-42，含有K39/P40位點未切割的aa 1-42，a）LysCERATOR，b）非重組替代Lys-C或c）重組替代Lys-C。Trastuzumab在消化前，在2 M尿素中進行變性、還原和烷基化，酶與底物比為1：50，置于0.1 M Tris緩沖液（pH 8.0）中，在37°C下浸泡2小時或過夜。數據由LC-MS采集，并通過基于Mascot概率的搜索引擎對Trastuzumab序列進行檢索，隨后在Skyline（MacCross實驗室）進行定量分析。
應用
優秀的消化效率和高賴氨酸特異性，生成更多獨特的肽，從而在復雜的蛋白質組學工作流程中更自信地識別蛋白質
在蛋白質組學應用中，蛋白水解酶的選擇對于實現蛋白質識別和全面蛋白質組覆蓋至關重要。高酶效率對于將復雜蛋白質混合物消化成適合LC–MS分析的肽至關重要。這提高了肽的產率，改善了序列覆蓋率，并提高了識別低豐度蛋白的可能性。在此背景下，大量獨特肽——尤其是未遺漏切割產生的肽——是酶性能的關鍵指標，因為它直接提升了蛋白質一致性識別和定量的信心。為了評估蛋白質組學環境下的消化性能，人類HeLa細胞裂解液使用LysCER和兩種替代的Lys-C酶消化，并比較了獨特肽的數量。消化后，肽通過磁珠上的蛋白質聚集捕獲（PAC）進行凈化，并用LC–MS進行分析。LysCERAT產生了最多獨特肽和含有三種Lys-C酶零漏切的肽的最高比例。使用LysCERAT檢測的全切割肽比例更高，表明其在復雜生物樣本上的消化效率更高，從而使肽庫比其他酶更具信息量和可解讀性。
酶特異性是蛋白質組學工作流程中的另一個關鍵參數。高水平的氨基酸特異性確保了可預測的切割模式，并減少非特異性肽的數量。這反過來最大限度地減少了光譜復雜性，并減少肽與譜匹配時的歧義。評估了三批不同的LysCERATOR，賴氨酸特異性持續高，約為97–98%。觀察到的批對批次重復性凸顯了LysCERATOR在蛋白質組學工作流程中的魯棒性和可靠性。
LysCERAT結合了賴氨酸特異性和消化效率，非常適合復雜的蛋白質組學工作流程。這些特征使得光譜更清晰，蛋白質鑒定更具信心，數據分析更穩健——尤其是對于具有大量潛在肽段分配的高度復雜樣本。
應用
高效肽定位，最小漏切和高序列覆蓋率，確保PTM識別自信。
高消化效率對于藥物開發中抗體候選物的可靠肽譜定位至關重要。肽定位被常規用于確認初級序列、識別翻譯后修飾（PTM）以及在開發和制造過程中監測產品質量。蛋白水解消化不完整或不一致會導致切割漏接，進而增加樣本復雜度，降低序列覆蓋率，并復雜化數據解釋。這可能掩蓋關鍵質量屬性（CQA），降低PTM識別和定位的信心，并對可比性研究和監管提交產生負面影響。
為評估LysCERATOR在抗體候選肽定位中的表現，人類IgG1Trastuzumab被利用LysCERATOR和兩種替代的商業化Lys-C酶——一種非重組酶和一種重組酶消化（見圖1）。經過2小時消化，LysCERAT實現了更優的切割效率，91%的總肽強度對應于零缺失切割的肽段，而非重組Lys-C為88%，重組Lys-C為65%。經過隔夜消化后，LysCERATOR中零漏切的肽段比例增加到97%，非重組Lys-C為93%，而重組替代Lys-C則顯著下降，僅為67%。
這些結果凸顯了LysCERator在肽譜定位工作流程中優于其他商業產品更優的消化效率。高效的消化，即使消化時間較短，也幾乎不遺漏切割，從而實現更快的周轉，同時不影響數據質量。這在高通量分析環境和早期開發階段尤為重要，因為速度和可重復性至關重要。為進一步證明LysCERATOR在肽定位中的效用，評估了Trastuzumab的序列覆蓋率（見圖2）。2小時后，序列覆蓋率達到重鏈95.1%，輕鏈覆蓋率達到95.3%。高序列覆蓋率提高了使用LysCERATOR檢測和定量翻譯后修飾的信心，這在抗體治療藥物的全面表征中至關重要。
上海寶葉生物科技有限公司
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